Архиепископ Амвросий (Андрей Степанович Зертис-Каменский) родился 17 октября 1708 года в городе Нежине в семье молдавского дворянина Степана Константиновича Зертиса, служившего при гетмане Украины Иване Степановиче Мазепе переводчиком с румынского, греческого и турецкого языков. За противодействие Мазепе, стремившемуся отделить Украину от России, Петр I наградил Зертиса поместьем в Нежинском полку.

После смерти отца в 1722 году жил на попечении дяди — соборного старца Киево-Печерской лавры Владимира (Каменского), фамилию которого присоединил к своей при поступлении в Киевскую духовную академию. Окончив её, в 1728–1733 годах учился в иезуитской Львовской академии, затем — в Славяно-греко-латинской академии в Москве.

В 1734 году поступил в Александро-Невский монастырь в Санкт-Петербурге, где в 1738 году принял постриг, в марте 1740 года был рукоположен во иеромонаха.

Назначен преподавателем, в 1742 году — префектом Александро-Невской духовной семинарии, много сделал для её устроения. С 5 апреля 1748 года — архимандрит Новоиерусалимского монастыря, член Святейшего Синода; будучи знатоком церковной архитектуры, восстановил запущенные строения обители.

В 1753 году был хиротонисан во епископа Переславль-Залесского и Дмитровского с оставлением в должности архимандрита Новоиерусалимского монастыря до окончательного восстановления обители.

7 марта 1761 года переведен на Сарскую и Подонскую кафедру, с 1764 года — Крутицкая и Можайская.

7 октября 1764 года возведён в сан архиепископа.

С 18 января 1768 года архиепископ Московский и Калужский.

Отличаясь незаурядными административными и хозяйственными способностями, начал обновление соборов Кремля, запретил нанимать крестцовых попов, был опекуном московского Воспитательного дома, на содержание которого тратил личные и епархиальные средства. С духовенством обходился жёстко, поэтому имел много недоброжелателей.

Переписывался со святителем Арсением (Мацеевичем) по вопросу о церковных имениях; по преданию, митрополит Арсений предсказал ему  мученическую кончину, сказав: «Ядый хлеб со мною, ты возвеличил на меня запинание и как вол ножом заклан будешь».

16 сентября 1771 года был убит в Донском монастыре в Москве во время чумного бунта, по одной из версий, за то, что распорядился опечатать кружку у чудотворной Боголюбской иконы Божией Матери для употребления денег на богоугодные дела, а возмущенная толпа обвинила его в намерении ограбить казну Богородицы; по другой — за то, что ввиду эпидемии намеревался убрать чудотворный Боголюбский образ, вокруг которого собирался народ.

Архиепископ Амвросий составил службу святителю Димитрию (Туптало), митрополиту Ростовскому, которая до начала XIX века помещалась в печатных минеях. В 1770 году перевел с древнееврейского языка Псалтирь.

Определением Святейшего Синода от 28 сентября 1771 года убийцы архиепископа Амвросия были преданы анафеме и повешены.

Погребен 4 октября 1771 года в Донском монастыре.